DYCZ-24B型加宽双垂直电泳仪实验操作全指南

作者：六一生物发布时间：2025-07-24 09:04:49 点击：

用DYCZ-24B做电泳实验三年，从一开始的手忙脚乱到现在能熟练带教新人，我总结出一套实用的操作流程。这款设备虽然操作不复杂，但每个步骤的小细节都影响着实验结果。今天就把最实用的DYCZ-24B型加宽双垂直电泳仪操作方法分享出来，全是日常实验中积累的实战经验。

一、实验前的准备工作

1. 试剂配制的精准把控

电泳缓冲液必须当天新鲜配制，这是保证条带清晰的关键。按配方称取Tris 3.03g、甘氨酸14.4g、SDS 1g，加去离子水定容到1L，用pH计严格调至8.3。有次图省事用了上周剩下的缓冲液，结果条带跑出来边缘模糊，重新配液后立刻恢复正常。配好的缓冲液装在棕色瓶里，4℃保存不超过一周，用前提前回温到室温，温差太大会影响电泳速度。

配胶试剂要提前检查有效期，APS必须放在4℃冰箱，开封超过一个月就别用了。我吃过惨痛教训——用过期APS配的胶，跑电泳时居然从中间裂开，不仅浪费样本还耽误实验进度。TEMED特别娇气，要避光保存，加的时候用100μl移液枪慢慢滴，新手千万别手抖加多了，不然胶凝得太快根本来不及灌。

2. 仪器检查的关键步骤

每次实验前都要仔细检查设备：电极丝是否有氧化痕迹（有的话用软布擦干净）、密封槽是否有胶渍残留、电源线接口是否松动。DYCZ-24B的聚碳酸酯槽体很耐用，但边缘的密封槽容易藏污纳垢，必须用棉签蘸去离子水擦拭干净，否则会影响密封性。

样品梳要提前检查齿间距是否均匀，有次用变形的梳子制胶，上样时样品孔大小不一，条带跑出来高低不齐。建议准备两套不同规格的梳子，日常实验用25齿，高通量筛选时换52齿，这样能灵活应对不同实验需求。玻璃板要用75%酒精擦拭干净，去除表面油污，不然胶会粘在板上揭不下来。

二、凝胶制备的核心技巧

1. 玻璃板组装的防漏秘诀

组装玻璃板是防漏胶的关键一步，也是新手最容易出错的地方。把密封垫套在大玻璃板的凹槽里，注意有缺口的一侧朝上，对准小玻璃板轻轻推到底，一定要听到清脆的"咔嗒"声才算到位。没听到声音绝对不能灌胶，十有八九会漏。有次赶实验没等听到声音就操作，结果分离胶漏了一槽，清理半小时还得重做。

组装好的玻璃板可以做个简单测试：轻轻晃动一下，两块板之间没有缝隙才算合格。实验室老师傅教我的防漏秘籍：在密封垫边缘薄薄涂一层凡士林（千万别太多，否则会污染胶），自从用了这招我再也没漏过胶。玻璃板外侧的水珠要擦干，不然灌胶时会影响视线判断胶面高度。

2. 分离胶灌制的实战技巧

根据目标蛋白分子量选择分离胶浓度：小于30kDa用12%，30-100kDa用10%，大于100kDa用8%。以10%分离胶为例，在50ml离心管中依次加入去离子水1.9ml、30%丙烯酰胺2.5ml、1.5M Tris（pH8.8）1.5ml、10%SDS 0.05ml、10%APS 0.05ml，最后加TEMED 0.003ml，轻轻摇匀（别产生气泡）。

灌胶时拿10ml移液管沿玻璃板内壁缓慢注入，速度控制在每分钟2-3ml，液面距玻璃板顶端1.5cm时停。有小气泡的话用针尖轻轻挑起，然后沿壁加一层异丙醇液封（高度约5mm），这样能让胶面平整。夏天室温高，胶30分钟就能凝固；冬天建议放在37℃温箱加速凝固，但别超过40分钟，否则胶会变脆容易裂。

3. 浓缩胶制备的注意事项

分离胶凝固后（能看到明显的界面），倒掉异丙醇，用滤纸轻轻吸干残留液体（千万别擦胶面，会破坏胶结构）。配制5%浓缩胶：去离子水1.4ml、30%丙烯酰胺0.33ml、1.0M Tris（pH6.8）0.25ml、10%SDS 0.02ml、10%APS 0.02ml、TEMED 0.002ml，混匀后缓慢注入玻璃板，刚好没过分离胶1cm即可。

插入样品梳时要垂直轻放，避免产生气泡，梳齿底部距分离胶面要留0.5cm空间。室温放置30分钟凝固，期间绝对不能碰梳子，有次不小心碰歪了，上样孔变形导致条带扭曲。凝固后要轻轻拔出梳子，动作太猛会把样品孔弄变形，拔出后用移液枪吸取电泳缓冲液冲洗样品孔，把残留的胶屑冲出来。

三、上样与电泳的操作要点

1. 样品处理的黄金标准

蛋白样品与5×上样缓冲液按4:1混合，95℃煮沸5分钟（别多煮，核蛋白超过6分钟会降解），立即冰浴3分钟，12000rpm离心30秒。上清液就是待上样样品，离心后的沉淀别碰，吸取时枪头别伸到管底，避免吸入杂质污染样品。

上样量要根据样品浓度调整，1.5mm厚的胶每孔别超过30μl，加样体积不超过样品孔容积的80%。有次加样太满，样品溢出污染相邻孔，条带全废了。低丰度蛋白可以增加上样量，但别超过30μl，否则条带会拖尾。样品要提前编号，对应记录到实验本上，避免混淆，这是最基础也最重要的习惯。

2. 上样操作的实用技巧

把胶板装入DYCZ-24B主机，大玻璃板朝外对准卡槽，轻轻按下后拧紧两侧螺丝（力度适中，太紧会夹裂玻璃板）。上槽加250ml缓冲液，必须没过样品孔；下槽加500ml，液面超过电极丝2mm，这样电流才稳定。液面不够的话电流不稳定，条带会跑歪，我专门用笔在槽壁画了条刻度线，每次加液到线就停，特别省心。

上样时用10μl或20μl移液枪，枪头斜插入样品孔1mm处，缓慢推注样品（2秒推完），让样品自然沉底。每加完一个样品停顿1秒，避免样品扩散。新手可以先用染料练习，掌握手感后再上实际样品。Marker加在最左侧孔，方便判断电泳进度，加样后要检查是否有气泡在样品孔底部，有的话用枪头轻轻吸出。

3. 电泳参数的设置规范

连接电源时注意正负极（红对红、黑对黑），千万别接反了，否则样品会往反方向跑，白白浪费时间和样品。推荐"两步法"电压设置：初始80V恒压电泳，等溴酚蓝进入分离胶（约20分钟）后，调至120V继续。这样既能让样品在浓缩胶里压成一条线，又能在分离胶里高效分离。

夏天室温超过25℃时，一定要在槽体周围放冰袋降温，有次没降温，胶跑得发烫，条带模糊不清，降温后重复实验立刻好转。电泳时间根据蛋白大小调整，小分子40分钟左右，大分子可能需要1小时。电泳过程中要时不时观察，缓冲液是否有气泡均匀上升（说明电流正常），发现异常立即断电检查。

四、凝胶拆卸与后续处理

1. 安全拆胶的正确方法

断电后先拔电源插头，再拧开螺丝取出胶板，安全永远是第一位的。用专用塑料铲（千万别用金属刀，会刮花玻璃板）从玻璃板顶端轻轻插入，左右晃动分离胶与玻璃板，听到"啵"的一声就说明胶分离了。动作一定要轻，别硬撬，不然胶会裂。我的第一块胶就是硬撬裂的，心疼了好久。

如果胶粘在板上取不下来，把玻璃板泡在去离子水里5分钟，水会渗透到胶和板之间，胶会自动剥离。胶的边缘要留一点，别切得太靠近条带，否则容易损坏目标条带。拿胶的时候要托着底部，别捏边缘，尤其是薄胶特别容易碎，好不容易跑好的胶可别在这步前功尽弃。

2. 染色脱色的优化方案

考马斯亮蓝染色步骤：将胶放入染色液（0.25%考马斯亮蓝R-250、45%甲醇、10%冰醋酸）中，摇床慢摇染色1小时（或4℃过夜）；然后转入脱色液（5%甲醇、7%冰醋酸），每2小时换一次液，直到背景清晰。着急看结果的话可以用热染法：染色液60℃水浴预热，胶放入后摇床染色20分钟，脱色时间也能缩短一半，但热染对胶的损伤较大，珍贵样品建议还是常规染色。

染好的胶用保鲜膜包裹，4℃保存可放一周，方便后续拍照分析。拍照时要垫上白色背景，调整好焦距和亮度，清晰记录实验结果。特别重要的条带可以用刀片切下来保存，做好标记，方便后续质谱鉴定或其他分析。

五、常见问题与解决办法

1. 条带异常的排查思路

条带扭曲多因电场不均：检查电极是否清洁、缓冲液是否够量、玻璃板是否卡紧。处理方法：用稀盐酸擦电极、补充缓冲液、重新安装胶板。条带拖尾可能是样品过载或变性不彻底：减少上样量、延长煮沸时间（最多7分钟）、增加离心时间。有次核蛋白条带拖尾严重，延长煮沸时间到6分钟后明显改善。

如果两块胶结果差异大，可能是两侧缓冲液液面不一致，或者其中一块板没卡紧。溴酚蓝跑得太慢说明电压太低或缓冲液浓度不对，跑得太快则可能是电压过高或缓冲液稀释了。这些问题都需要耐心排查，积累经验后就能快速找到原因。

2. 仪器维护的保养心得

每次实验后立即清洗仪器是必须养成的习惯：拆下胶板，用去离子水冲洗槽体，电极丝用软布蘸水擦干净，避免缓冲液结晶腐蚀。有次偷懒没清洗，下次用的时候电极接触不良，清理半小时才恢复。每周做一次深度保养：用75%酒精擦拭槽体消毒、检查密封垫弹性（变硬就更换）、样品梳用蒸馏水浸泡。

电极丝是易损件，大概300次电泳后会有些氧化，用细砂纸轻轻打磨就能恢复，不用急着换。存放时把玻璃板竖直放在专用架子上，别叠着压，不然会变形；样品梳洗净后单独收纳；电源线绕好避免挤压。做好这些保养，DYCZ-24B用个5-8年完全没问题，性价比超高。

做电泳实验久了就会发现，熟练掌握这些操作技巧后，用DYCZ-24B型加宽双垂直电泳仪跑出来的条带又直又清晰，不仅数据可靠，看着也舒心。其实实验设备就像战友，你对它用心维护，它就会给你稳定的回报，这是我用了三年多最深的体会。希望这些经验能帮你少走弯路，让实验更顺利。

本文由北京六一生物编辑整理。

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