DYCZ-24A双垂直电泳仪实验全流程：从制胶到电泳的精准操作手册

一、实验前的关键准备

1. 仪器组装与安全检查 
   1. DYCZ-24A的组装需确保玻璃板与制胶器紧密贴合，避免缓冲液渗漏。安装时需检查硅胶密封条是否完整，若有老化痕迹需及时更换。
   2. 严禁在组装完成前连接电源，防止短路风险。

1. 试剂配置要点 
   1. 丙烯酰胺溶液需现配现用，避免聚合失效。建议使用0.45μm滤膜过滤，去除杂质。
   2. 缓冲液（如Tris-Glycine）需预冷至4℃，以提升电泳初期的条带锐度。

二、制胶环节的实战技巧

1. 灌胶与除气泡 
   1. 采用"三明治注胶法"：先倒入分离胶至玻璃板2/3高度，再沿壁缓慢加入浓缩胶，减少界面扰动。
   2. 若出现气泡，可用细长针头蘸取少量无水乙醇靠近气泡，利用表面张力将其引出。

1. 聚合控制 
   1. 室温25℃时，分离胶聚合需40-50分钟，可通过观察残留液体是否分层判断聚合完成度。
   2. 关键提示：聚合不完全会导致电泳时胶体断裂，可在胶面覆盖异丙醇隔绝氧气加速聚合。

三、加样与电泳的核心操作

1. 样品处理与上样 
   1. 蛋白样品需与上样缓冲液按4:1混合，95℃变性5分钟，离心（12,000rpm, 1min）去除杂质。
   2. 上样时移液器吸头需垂直插入孔格底部，缓慢释放样品，避免冲击胶面导致扩散。

1. 电泳参数优化 
   1. 分段电压法：
      • 浓缩胶阶段：80V恒压（约30min，至溴酚蓝进入分离胶）
      • 分离胶阶段：120V恒压（至溴酚蓝距底部1cm）
   2. 冷却系统联动：夏季需调高冷却水循环速度，维持槽内温度≤15℃。

四、故障排除与结果优化

五、实验后的维护规范

1. 清洁流程 
   1. 立即拆卸胶板，浸泡于0.1M NaOH中30分钟去除残留蛋白，再用超纯水冲洗3次。

1. 长期存放 
   1. 电极丝涂抹凡士林防氧化，槽体倒置晾干后覆盖防尘罩。

延伸应用：双向电泳适配方案

1. 缓冲液增至800ml以覆盖胶条
2. 第一向电泳后，需用平衡液（含DTT）处理胶条30分钟再转移

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