DYCZ-24EN型双垂直电泳仪实验方法：从制胶到结果分析的实操指南

作者：六一生物发布时间：2025-07-23 09:25:21 点击：

在蛋白质研究实验室里，电泳实验的成功直接影响后续结果可靠性。用DYCZ-24EN做电泳两年多，从对着说明书一步步摸索，到能带新人顺利完成实验，我总结出一套实用流程。这台仪器设计人性化，但每个DYCZ-24EN型双垂直电泳仪实验方法都有细节要注意，掌握这些技巧能显著提升实验效率。

一、实验前的准备工作

1. 试剂与器材核查

每次实验前我都会列清单逐一检查：DYCZ-24EN主机、配套玻璃板（大中小各两块）、密封垫、25齿/40齿样品梳、50ml离心管、移液枪（1ml/100μl/10μl）、电泳缓冲液及配胶试剂。少一样就得临时找，特别影响实验节奏。

缓冲液务必当天配制：称取Tris 3.03g、甘氨酸14.4g、SDS 1g，加去离子水定容到1L，用pH计调至8.3。别信肉眼看颜色的土方法，有次师妹没调pH，跑出来的条带像波浪线，调准后立刻恢复正常。配好的缓冲液装棕色瓶，4℃保存不超过一周，用前提前回温到室温。

2. 仪器状态检查

实验前必须检查仪器状态：电极丝是否有氧化痕迹（有的话用软布擦净）、密封槽是否有胶渍残留、电源线接口是否松动。DYCZ-24EN的聚碳酸酯槽体耐用，但边缘密封槽易藏污纳垢，用棉签蘸去离子水擦拭干净，避免影响密封性。

样品梳要提前检查齿间距是否均匀，有次用变形梳子制胶，上样孔大小不一，条带跑出来高低不齐。建议备两套不同齿数的梳子，简单样品用25齿，复杂样品换40齿，灵活应对不同需求。

二、凝胶制备的关键步骤

1. 玻璃板组装技巧

组装玻璃板是防漏胶的关键。把密封垫套在大玻璃板凹槽，缺口朝上，对准小玻璃板轻推到底，听到"咔嗒"声才算到位。没听到声音千万别灌胶，十有八九会漏。有次赶实验没等听到声音就操作，分离胶漏了一槽，清理半小时还得重做。

组装好的玻璃板要简单测试：轻轻晃动，两块板间没有缝隙才算合格。新手可在密封垫边缘薄涂凡士林（别太多，否则污染胶），这是实验室防漏秘籍，用这招后我再也没漏过胶。

2. 分离胶配制与灌胶

根据目标蛋白分子量选分离胶浓度：<30kDa用12%，30-100kDa用10%，>100kDa用8%。以10%分离胶为例，50ml离心管中依次加去离子水1.9ml、30%丙烯酰胺2.5ml、1.5M Tris（pH8.8）1.5ml、10%SDS 0.05ml、10%APS 0.05ml，最后加TEMED 0.003ml，轻轻摇匀（别产生气泡）。

灌胶时拿10ml移液管沿玻璃板内壁缓慢注入，速度控制在每分钟2-3ml，液面距顶端1.5cm时停。有小气泡用针尖轻轻挑起，沿壁加异丙醇液封（高度5mm）让胶面平整。夏天室温高，胶30分钟凝固；冬天放37℃温箱加速凝固，但别超40分钟，否则胶会变脆。

3. 浓缩胶制备要点

分离胶凝固后（看到明显界面），倒掉异丙醇，用滤纸吸干残留液体（别擦胶面）。配制5%浓缩胶：去离子水1.4ml、30%丙烯酰胺0.33ml、1.0M Tris（pH6.8）0.25ml、10%SDS 0.02ml、10%APS 0.02ml、TEMED 0.002ml，混匀后注入玻璃板，没过分离胶1cm即可。

插入样品梳要垂直轻放，别产生气泡，梳齿底部距分离胶面留0.5cm空间。室温放置30分钟凝固，期间别碰梳子，有次不小心碰歪，上样孔变形导致条带扭曲。凝固后轻轻拔出梳子，用移液枪吸取缓冲液冲洗样品孔，冲掉残留胶屑。

三、样品处理与上样技巧

1. 样品预处理规范

蛋白样品与5×上样缓冲液按4:1混合，95℃煮沸5分钟（核蛋白别超6分钟，否则降解），立即冰浴3分钟，12000rpm离心30秒。上清液待上样，离心后沉淀别碰，吸取时枪头别伸到管底，避免吸入杂质。

上样量根据浓度调整，1.0mm厚胶每孔别超20μg，体积不超样品孔容积80%（约20μl）。有次加样太满，样品溢出污染相邻孔，条带全废了。低丰度蛋白可增加上样量，但别超30μl，否则条带会拖尾。

2. 上样操作实战技巧

把胶板装入DYCZ-24EN主机，大玻璃板朝外对准卡槽，轻按后拧紧两侧螺丝（力度适中，太紧会夹裂玻璃板）。上槽加300ml缓冲液（必须没过样品孔），下槽加450ml（液面超电极丝2mm）。液面不够电流不稳定，条带会跑歪。

上样用10μl或20μl移液枪，枪头斜插入样品孔1mm处，缓慢推注（2秒推完）让样品自然沉底。每加完一个样品停顿1秒，避免扩散。新手可用染料练习，掌握手感后再上实际样品。Marker加在最左侧孔，方便判断进度。

四、电泳参数设置与过程监控

1. 电压设置的黄金标准

连接电源注意正负极（红对红、黑对黑），别接反，否则样品会反向跑。推荐"两步法"电压：初始80V恒压，溴酚蓝进入分离胶（约20分钟）后调至120V。这样样品在浓缩胶里压成线，分离胶里高效分离。

夏天室温超25℃时，电压降到100V或槽体周围放冰袋降温。有次没降温，胶跑得发烫，条带模糊，降温后重复实验立刻好转。电泳时间按蛋白大小调整，小分子40分钟左右，大分子可能需1小时。

2. 电泳过程注意事项

电泳时要观察仪器状态：缓冲液是否有气泡均匀上升（说明电流正常）、槽体温度是否过高、有无漏液。听到电极"滋滋"声立即断电，这是电极氧化，用砂纸轻磨后再继续。

别离开实验室太久，有次电泳快结束没及时断电，溴酚蓝跑出胶外，小分子蛋白跟着流失。建议设闹钟，比预计时间提前10分钟回来，溴酚蓝距胶底1cm时断电最合适。

五、凝胶拆卸与后续处理

1. 安全拆胶方法

断电后先拔电源，再拧螺丝取胶板。用专用塑料铲（别用金属刀，会刮花玻璃板）从顶端轻插，左右晃动分离胶与玻璃板，听到"啵"声说明胶分离了。动作要轻，别硬撬，不然胶会裂。

胶粘在板上取不下来时，泡去离子水5分钟，水渗透后胶会自动剥离。我的第一块胶就是硬撬裂的，用这方法后再也没损坏过凝胶。

2. 染色与脱色技巧

考马斯亮蓝染色：胶放入染色液（0.25%考马斯亮蓝R-250、45%甲醇、10%冰醋酸），摇床慢摇1小时（或4℃过夜）；转入脱色液（5%甲醇、7%冰醋酸），每2小时换液至背景清晰。

想加快可用"热染法"：染色液60℃预热，胶放入后摇床染20分钟，脱色时间缩短一半。但热染对胶损伤大，珍贵样品建议常规染色。染好的胶用保鲜膜包裹，4℃保存可放一周，方便拍照分析。

六、常见问题排查与解决

1. 条带异常的应急处理

条带扭曲多因电场不均：检查电极是否清洁、缓冲液是否够量、玻璃板是否卡紧。处理方法：稀盐酸擦电极、补缓冲液、重新装板。

条带拖尾可能是样品过载或变性不彻底：减少上样量、延长煮沸时间（最多7分钟）、增加离心。有次核蛋白条带拖尾，煮沸时间延到6分钟后明显改善。

2. 仪器故障快速排查

通电无电流：检查电源是否正常、电极接触是否不良、缓冲液是否太稀。先换电源排除问题，再打磨电极触点或换新缓冲液。

漏液问题：90%是玻璃板没装到位，重新组装听到"咔嗒"声；少数是密封垫老化，换新即可（配件便宜，建议常备）。

七、仪器维护与保养心得

每次实验后立即清洗：拆胶板，去离子水冲槽体，软布擦电极丝，避免缓冲液结晶腐蚀。有次偷懒没清洗，下次用时空电极接触不良，清理半小时才恢复。

每周深度保养：75%酒精擦槽体消毒、检查密封垫弹性（变硬就换）、样品梳蒸馏水浸泡。每月用0.1M盐酸擦电极丝去氧化层，延长寿命。

存放时玻璃板竖直放专用架，别叠重物；样品梳洗净单独收纳；电源线绕好防挤压。长期不用时，密封垫泡蒸馏水里防老化。做好保养，DYCZ-24EN用5-8年完全没问题。

做电泳久了发现，简单操作里藏着很多门道。掌握这些技巧后，用DYCZ-24EN跑的条带又直又清晰，数据可靠看着舒心。实验设备就像战友，你对它用心，它就给你稳定回报，这是我用两年多最深的体会。

本文由北京六一生物编辑整理。

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